无内毒素质粒大量提取试剂盒

内毒素是质粒提取中常见的污染物，由于真核细胞对内毒素非常敏感，因此，如果质粒中含有内毒素会大大降低真核细胞转染效率。本试剂盒采用独特的硅基质膜吸附技术，高效专一的结合质粒DNA；同时采用新型内毒素清除剂（ER）快速去除内毒素、蛋白等杂质，内毒素水平可低于0.1 EU/μg，适用于提取100-200 ml过夜培养的大肠杆菌。溶液包含指示剂，指示裂解、中和是否完全，实现操作的可视化，确保质粒提取的质量。质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件，细胞的裂解，质粒拷贝数，质粒的稳定性，抗生素等因素有关。

使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。

1. 低温时先检查Buffer P2中是否出现浑浊，如果有浑浊现象，可在42℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
2. 提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒，应加大菌体使用量，同时按照比例增加P1、P2、N3的用量，洗脱缓冲液应在65-70℃预热。可以适当地延长吸附和洗脱的时间，以提高提取效率。
3. Buffer P1在使用前先加入RNase A溶液（将试剂盒提供的RNase A全部加入，终浓度100 μg/ml），混匀后可4℃保存6个月。如果Buffer P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量RNA残留，在Buffer P1中补加RNase A即可。
4. 第一次使用前请先在Buffer WB2瓶加入标签指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框内打钩标记，以免重复加入！
5. Buffer EB中不含有螯合剂EDTA成分，不影响下游酶切、连接等反应。