质粒小提取试剂盒（5-15ML）

内毒素是质粒提取中常见的污染物，由于真核细胞对内毒素非常敏感，因此，如果 质粒中含有内毒素会大大降低真核细胞转染效率。本试剂盒采用独特的硅基质膜吸附 技术，高效专一的结合质粒 DNA；同时采用特殊优化的碱裂解法裂解细胞，适用于提 取 5-15ml 过夜培养的大肠杆菌。溶液包含指示剂，指示裂解、中和是否完全， 实现操 作的可视化，确保质粒提取的质量。质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件， 细胞的裂解，质粒拷贝数，质粒的稳定性，抗生素等因素有关。 使用本试剂盒提取的质粒 DNA 可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、 连 接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。

1）提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质 粒或大于 10 kb 的大质粒，应加大菌体使用量，同时按照比例增加 P1、P2、P4 的用 量，洗脱缓冲液应在 65-70℃预热。可以适当的延长吸附和洗脱的时间，以增加提 取效率。

2) 第一次使用前请先在 Buffer WB2 瓶加入标签指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请 及时在方框内打钩标记，以免重复加入！

3) Buffer P1 在使用前先加入 RNase A 溶液（将试剂盒提供的 RNase A 全部加入，终浓 度 100 μg/ml），混匀后可 4℃保存 6 个月。如果 Buffer P1 中 RNase A 失活，提取 的质粒可能会有微量 RNA 残留，在 Buffer P1 中补加 RNase A 即可。 

4) 低温时先检查 Buffer P2 中是否出现沉淀析出，如果有沉淀析出，可在 42℃水浴中 加热几分钟，即可恢复澄清。