质粒小量提取试剂盒（1-15ML）

本试剂盒采用碱裂法裂解细胞，再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性结合溶液中的 DNA，适用于提取 1-15 ml 过夜培养的大肠杆菌。溶液包含指示剂，指示裂解、中和是否完全，实现操作的可视化，确保质粒提取的质量。特殊改进的 SDS-碱裂法缓冲液系统，与普通的提取方法相比，本试剂盒提取的质粒产量更高，更适合低拷贝质粒DNA 的提取。质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件，细胞的裂解，质粒拷贝数，质粒的稳定性，抗生素等因素有关。

使用本试剂盒提取的质粒 DNA 可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译等。

1) 环境温度低时先检查 Buffer P2 是否出现浑浊，如果有浑浊现象，可在 42℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。

2) 所有离心步骤均使用台式离心机室温下进行，转速为 12,000 rpm（~13,400×g）。

3) 提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。

4) 实验前使用平衡液处理吸附柱，可以最大限度激活硅基质膜，提高得率。

5) Buffer P1 在使用前先加入 RNase A 溶液（将试剂盒提供的 RNase A 全部加入，终浓度 100 ug/ml），混匀后 4℃保存。如果 Buffer P1 中 RNase A 失活，提取的质粒可能会有微量 RNA 残留，在 Buffer P1 中补加 RNase A 即可。

6) 第一次使用前请先在 Buffer WB2 瓶加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框内打钩标记，以免重复加入！

7) Buffer EB 中不含有螯合剂 EDTA 成分，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保 pH 大于 7.5，pH 过低影响洗脱效率。

8) 提取试剂配比量是按照1-5 ml菌液上样量计算。如需5-15 ml菌液。请按下表增加量。